5大黄金要点,速学N端测序-蛋白相关服务 -技术服务-生物在线
北京百泰派克生物科技有限公司
5大黄金要点,速学N端测序

5大黄金要点,速学N端测序

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产品名称: 5大黄金要点,速学N端测序

英文名称: 5 Golden Points to Learn N-Terminal Sequencing Quickly

产品编号: n-terminal-sequencing-zh14

产品价格: 询价

产品产地: 中国北京

品牌商标: 百泰派克生物科技

更新时间: 2025-04-10T12:31:31

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N端测序(N-terminal sequencing)用于解析蛋白质或多肽的N端氨基酸序列。在实验过程中,为确保测序准确性和可靠性,以下5大黄金要点至关重要。

 

1、确保样品纯度:减少杂质干扰

N端测序对样品的纯度要求极高,杂质可能导致测序信号重叠,影响序列解析。样本纯度直接影响标记效率与检测灵敏度。因此,在测序前应使用高效纯化方法(如HPLC或SDS-PAGE结合电泳转膜)去除杂质,确保样品单一性。

常见的蛋白纯化方法包括:

(1)高效液相色谱(HPLC):可用于高纯度分离蛋白,去除杂质蛋白和小分子干扰物质。

(2)SDS-PAGE电泳结合PVDF膜转移:通过凝胶电泳纯化蛋白,再转膜用于测序。

(3)亲和纯化:适用于带有特定标签的重组蛋白,如His标签、GST标签等。

此外,样品在纯化过程中需特别注意避免蛋白降解和化学修饰,以防影响N端氨基酸的准确检测。

 

2、优化样品浓度:确保信号稳定

N端测序对样品量的要求较为严格,样品量过少会导致测序信号微弱,难以解析氨基酸序列;而样品过量则可能引起试剂消耗过快,导致反应不完全或背景噪声增加。

一般建议:

(1)优化样品浓度:确保样品浓度适中,使Edman降解反应可稳定进行。

(2)避免使用含高浓度盐的缓冲液:盐离子会影响试剂的有效性,干扰降解反应。

(3)冻干或透析:若样品溶剂不适用于测序,应进行适当的溶剂置换处理。

研究人员应根据所使用的N端测序仪器和测序平台的要求,合理调整样品量,确保信号强度足够但不过载。

 

3、预检测N端修饰:避免测序受阻

某些蛋白的N端可能存在化学修饰,例如:

(1)N端乙酰化(N-terminal acetylation):常见于真核细胞蛋白,可阻止Edman降解。

(2)N端甲酰化(N-formylation):原核生物蛋白翻译后可能残留甲酰基,影响测序。

(3)N端环化(如脯氨酸环化):某些蛋白的N端脯氨酸可自发环化,阻止Edman降解。

在实验前,建议使用质谱(MS)等方法预先检测N端修饰情况。如果检测到N端封闭,可考虑去修饰处理(如化学去乙酰化或酶解)或选择其他适合的测序方法(如质谱测序)。

 

4、控制反应条件:提高测序稳定性

Edman降解反应对pH值、温度和试剂浓度要求严格,反应条件不当可能影响降解效率或产生副反应。优化并稳定实验条件,以提高测序的准确性和可重复性。

影响降解反应的关键因素包括:

(1)pH值:Edman降解过程对酸碱环境敏感,pH值偏差可能影响降解效率。

(2)温度控制:反应温度过高可能导致氨基酸降解,过低则影响反应速率。

(3)试剂新鲜度:测序试剂(如PITC)易受环境影响,应确保试剂新鲜无污染。

 

5、结合其他技术:提升测序准确性

N端测序受限于某些蛋白的二硫键、糖基化或复杂结构,难以解析完整序列。可结合质谱等其他技术,获取更全面的序列信息,提升数据可靠性。

常用的辅助技术包括:

(1)质谱(MS)分析:可用于检测蛋白的整体序列和翻译后修饰,弥补N端测序的局限性。

(2)蛋白酶切割:通过蛋白酶水解蛋白生成较小的肽段,便于N端测序解析。

(3)二级质谱(MS/MS):可提供更详细的序列信息,特别适用于复杂蛋白的鉴定。

综合使用多种技术手段,可大幅提升蛋白质测序的准确性,为蛋白结构与功能研究提供更可靠的数据支持。

 

N端测序的黄金要点聚焦于“样品-仪器-数据-验证”全链条优化。掌握这五大核心,不仅能规避基础错误,更能从海量数据中精准提取生物学意义。百泰派克生物科技作为专业的生物质谱多组学优质服务商,可为客户提供N端测序服务。

 

百泰派克生物科技特色项目

 

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析,提供基于质谱的蛋白测序分析服务,包括对蛋白质的氨基酸组成分析,N端测序,C端测序和全序列分析,以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质,提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务,对蛋白序列进行分析。

 

※服务优势:

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug,即可完成检测;

6.测序不受N端封闭,PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

 

 

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC,提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务,助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

 

※服务优势:

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析,发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法,适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高,实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白,线性范围广;

5.专业生物信息学分析,分析更系统准确。

 

 

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析,采用金属元素标记物(通常是金属元素标记的特异抗体)标记细胞表面和内部的分子,然后用流式细胞原理分离单个细胞,再用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析单个细胞的原子质量谱,最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

 

※服务优势:

1.技术先进,填补技术空白

采用金属标记抗体技术,避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征,百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大,成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制,所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右,而流式质谱技术一次(单样本)就可分析至少10^5的细胞,实现了数量级的提高,且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化,在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景;

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外,质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰;

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

 

 

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析,可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究,旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案,深入挖掘未知的靶标。

 

 

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术,MALDI TOF,高效色谱分离技术,提供一系列完善的生物药物分析方案,从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析,到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务,帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

 

 

百泰派克生物科技七大检测平台

 

 

 

百泰派克生物科技-生物制品表征,生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则,通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证,建立了完备的质量体系,数据冷热/异地备份,设备定期计量/期间核查,软件审计追踪,为客户提供一体化解决方案和技术服务,支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系,专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务;

2.获国家CNAS实验室认可,为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务;

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等;

4.七大质量控制检测平台,满足您一站式服务需求;

5.服务3000+企业,10000+客户的选择;

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

 

 

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