HPLC蛋白质定量，即高效液相色谱蛋白质定量，是一种利用高效液相色谱技术对蛋白质样品进行精确定量分析的方法。其核心在于利用HPLC系统的高分辨率和高灵敏度，准确测定样品中蛋白质的浓度。这项技术的应用范围非常广泛，涵盖了生物制药、食品科学、环境科学等多个领域。在生物制药中，HPLC蛋白质定量用于药物研发和质量控制，确保药物中蛋白质的含量符合标准。在食品科学中，该技术用于检测食品中的蛋白质含量，为营养分析提供可靠数据。在环境科学中，HPLC蛋白质定量用于监测水体或土壤中的蛋白质污染，帮助制定污染控制措施。HPLC蛋白质定量之所以备受青睐，主要得益于其高效性和准确性。高效液相色谱的分离能力使其能够从复杂样品中分离出特定蛋白质，而先进的检测器则能对分离出的蛋白质进行精确定量。这种技术的应用不仅提升了检测的效率，也增强了结果的可靠性。随着技术的不断进步，HPLC蛋白质定量的应用深度和广度都在持续扩展，为各领域的研究和应用提供了有力支持。

一、技术流程

1、样品制备

在进行HPLC蛋白质定量之前，样品的制备是至关重要的一步。样品制备通常包括蛋白质的提取、纯化和浓缩。提取步骤需要根据样品的性质选择合适的缓冲液，以确保蛋白质的稳定性和活性。纯化过程中可以采用超滤、沉淀等方法去除杂质，浓缩步骤则可以通过冻干或透析等方式实现。

2、色谱分离

HPLC蛋白质定量的核心是色谱分离。选择合适的色谱柱和流动相是成功分离蛋白质的关键。常用的色谱柱类型包括反相色谱柱和离子交换色谱柱。流动相的选择则需要根据蛋白质的性质进行优化，以实现最佳的分离效果。

3、检测与定量

在色谱分离后，下一步是检测和定量。常用的检测器有紫外检测器（UV）、荧光检测器和质谱检测器。紫外检测器通过检测紫外吸收峰来实现蛋白质的定量，而荧光检测器则通过检测荧光信号来提高灵敏度。质谱检测器则可提供分子量信息，进一步提高定量的准确性。

二、实验注意事项

1、色谱柱的选择与维护

色谱柱是HPLC蛋白质定量中的组件之一。选择合适的色谱柱可以提高分离效率，减少分析时间。在使用过程中，色谱柱需要定期清洗和再生，以延长其使用寿命。

2、流动相的选择与优化

流动相的选择直接影响蛋白质的分离效果。需要根据蛋白质的物理化学性质优化流动相的组成、pH和离子强度。流动相的纯度也需严格控制，以避免杂质干扰。

3、样品的稳定性

蛋白质样品的稳定性是影响HPLC蛋白质定量结果的因素。为了保证样品的稳定性，需要在低温条件下保存样品，避免反复冻融。

百泰派克生物科技提供专业的HPLC蛋白质定量服务，依托先进的技术平台和经验丰富的科研团队，致力于为客户提供高质量的分析服务。我们的服务不仅能满足科研需求，还能为您在产品质量控制、药物开发等方面提供有力支持。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

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